細胞凍存應該注意什么？

       細胞凍存是細胞生物學和生物醫學研究中至關重要的一環，它允許研究者在長時間內保存細胞系，以供后續實驗使用。為了確保細胞在凍存過程中的存活率和復蘇后的健康狀態，上海儒安生物科技有限公司帶我們了解相關的注意事項。

一、選擇合適的細胞狀態

       1.細胞密度與活力：應選擇對數生長期、細胞活力達90%以上、密度約為80%-90%的細胞進行凍存。此時細胞代謝旺盛，增殖能力強，凍存后復蘇的成功率也較高。

       2.細胞健康：確保細胞無污染、無異常形態，以保證凍存細胞的品質。

二、配制合適的凍存液

       1.凍存液成分：常用的凍存液成分包括培養基、血清和二甲基亞砜（DMSO）。一般比例為培養基:血清:DMSO=7:2:1，但具體比例可根據細胞類型進行調整。

       2.提前配制：凍存液應提前配制并置于2℃-8℃下備用，避免DMSO直接加入細胞懸液中產生熱效應而損傷細胞。

三、正確的凍存操作步驟

       1.細胞處理：去除舊培養基，用預熱的PBS緩沖液清洗細胞，然后加入胰酶進行消化。消化完成后，用含血清的培養基終止消化，并輕輕吹打使細胞懸浮。

       2.離心收集：將細胞懸液進行離心，去除上清液，收集細胞沉淀。離心速度和時間需根據細胞類型調整，一般約為800-1000rpm，離心5-10分鐘。

       3.重懸與分裝：用預冷的凍存液重新懸浮細胞沉淀，并分裝至凍存管中。每支凍存管中的細胞量和凍存液體積需根據實驗需求確定，一般推薦細胞密度為1-2×10^6 cells/mL，凍存液用量為0.5-1mL/支。

四、梯度降溫與長期保存

       1.梯度降溫：為避免細胞在快速降溫過程中形成冰晶而受損，應采用梯度降溫的方式進行凍存。傳統方法是將分裝好的凍存管放入程序降溫盒中，然后置于-80℃冰箱中過夜，再轉移至液氮中長期保存。若無程序降溫盒，則可依次置于4℃、-20℃、-80℃冰箱中逐步降溫，完成后轉移至液氮中。

       2.標記與記錄：在凍存管上清晰標記細胞名稱、代數、凍存時間、操作者姓名等信息，以便后續查找和使用。

五、其他注意事項

       1.無菌操作：整個凍存過程應在無菌條件下進行，以防止細胞污染。

       2.避免反復凍融：細胞一旦凍存，應避免反復凍融，以免損傷細胞。

       3.定期檢測：對于長期保存的細胞系，應定期取出少量細胞進行復蘇檢測，以評估其存活率和生長狀態。

       細胞凍存是一項復雜而精細的工作，需要研究者在細胞狀態選擇、凍存液配制、操作步驟執行以及長期保存管理等方面都給予充分的關注和重視。只有這樣，才能確保細胞在凍存過程中的存活率和復蘇后的健康狀態，為后續的細胞生物學和生物醫學研究提供可靠的細胞資源。